Dean Winchester (Jensen Ackles):

Dean, né le 24 janvier 1979 à Lawrence (Kansas). Il a un petit frère de quatre ans, Sam Winchester, qui est son cadet. Il adore sa famille, le rock classique et sa voiture.Sa mère est tuée par un démon quand il a quatre ans au-dessus du berceau de son frère. À partir de là, Sam et lui sont entraînés par leur père à chasser et tuer les démons et autres créatures surnaturelles. Contrairement à son frère, avoir été élevé comme « un guerrier » ne lui pose aucun problème et il ne cherche pas à avoir une vie ordinaire.

Samuel “Sam” Winchester (Jared Padalecki) :

Sam est né le 2 mai 1983 à Lawrence (Kansas). Sam a 6 mois lorsque sa mère meure. C'est son grand frère, Dean, qui veillera principalement sur lui alors que John se concentrera sur sa tâche de chasseur de forces occultes liées au surnaturel. Pendant que Dean et son père livreront bataille contre les forces du mal, Sam, lui, finira par partir faire des études à l'université Stanford, abandonnant ainsi ces derniers au grand dam de John Winchester.

John Winchester (Jeffrey Dean Morgan):

Le jeune homme est « mécanicien d'une famille de mécaniciens »ep 5. Il trouve un travail dans un garage et en deviendra ensuite le copropriétaire avec Mike Guenther. Il s'installe dans une maison avec Mary. Le premier de ses fils, Dean, nait en 1979 puis vient Sam en 1983. Son couple connait des difficultés et, au moins une fois, John quitte temporairement le domicile familial

Mary Winchester (Samantha Smith):

Issue d’une famille de chasseurs, elle quitte cette vie là pour vivre avec John. A partir de ce moment, sa biographie est floue. Elle est également dévouée à sa famille.

Jessica Moore (Adrianne Palicki) :

Jessica est la copine de Sam, elle sera tuée de la même façon que la mère de Sam et Dean, on en déduit alors qu'il s'agit là de l'œuvre d'Azazel. La mort de Jessica l'obligera à reprendre du service avec son frère dans la chasse aux démons.

Bobby Singer (Jim Beaver):

Bobby est un ami de John qui est devenu chasseur après avoir été contraint de tuer sa femme possédée. Pendant toutes ces années, il a collecté de nombreuses informations dans le domaine du paranormal et du surnaturel. Dans la saison 1, il apparaît dans l'épisode "Devil's Trap" et montre à Sam et Dean comment procéder à un exorcisme.

Les Ghostfacers :

C’est le nom adopté par Harry Spangler (Travis Wester) et Ed Zeddmore (A .J Buckley) pour leur série de télé-réalité sur un groupe d’enquêteurs sur le paranormal.

Ellen Harvelle (Samantha Ferris):

Ellen est une vieille amie de John. Elle est veuve; son mari William, qui était un chasseur comme les Winchester, a été tué par un Démon. En effet, lors de sa dernière chasse, il était avec John et un malheureux accident est survenu.

Johanna “Jo” Harvelle (Talona Tal):

Jo est la fille de Ellen. Elle aide les frères dans plusieurs chasses. Elle et Dean auront un petit flirt. Elle souhaite devenir chasseuse, mais sa mère est totalement contre.

Ash (Chad Lindberg)

Ash est un petit génie de l’informatique. Il vit avec Ellen et Jo dans le bar, passant sont temps à boire et à trouvé des petits contrats.

Lisa Braeden (Cindy Sampson):

< span style="color: #000000;"> Elle est une ancienne conquête de Dean, et lorsqu'elle le revoit, elle est devenue mère d'un petit garçon prénommé Ben. Le petit ressemble comme deux gouttes d'eau à Dean, lui faisant se demander s'il ne serait pas le père. Mais Lisa lui assure que non. Cependant, elle souhaitera que Dean reste, afin de jouer ce rôle auprès de son fils. Mais Dean partira.

Ben Braeden ( Nicholas Elia):

Benjamin Issac "Ben" Braeden est le fils de Lisa Braeden. Il apparaît dans la saison 3, alors que Dean rend visite à sa mère, et semble beaucoup ressembler à l’aîné des Winchesters. Ce qui causera quelque inquiétude à Dean, mais Lisa lui assurera que Ben n'est pas son fils.

Castiel (Misha Collins):

Castiel apparaît à la fin du premier épisode de la saison 4 devant Bobby et Dean. Il montre sa vraie nature en révélant à Dean qu'il est un ange de Dieu et qu'il a eu l'ordre de le faire sortir de l'enfer car Dieu à un travail pour lui. C'est alors que Castiel apparaîtra à Dean pour le guider vers sa destinée. Par la suite, Castiel commencera à douter des intentions réelles de Dieu. On apprend plus tard que Castiel possède le corps d'un père de famille, Jimmy qui a été choisi pour sa grande foi.

Adam Milligan (Jake Abel):

C'est le troisième frère Winchester, de père John Winchester mais pas de même mère. Il a eut une enfance normal, John ne l’ayant pas entrainé dans les histoires de chasses, mais à des matchs de baseball. Dean et Sam seront par ailleurs jaloux de lui.

Pamela Barnes ( Tracy Dinwiddie)

Pamela est une médium réputée qui apparaît pour la première fois dans l'épisode 1 de la quatrième saison, La Main de Dieu. Elle est présentée par Bobby aux frères Winchester pour les aider avec les anges. Malheureusement, Castiel, l'ange, lui brûlera les yeux lors d'une séance et Pamela deviendra aveugle. Ses sens n'en seront pas moins aiguisés

Chuck Shurley (Rob Benedict):

Chuck est un prophète de Dieu. Il est l'auteur d'une série de livres appelés Supernatural, qu'il a écrit sous le pseudonyme de Carver Edlund. Le contenu de ses livres raconte la vie de Sam et Dean, qu'il connait en détail grâce à des visions. Il est protégé par l'Archange Raphaël.

Jody Mills (Kim Rhodes):

Jody Mills est la shérif de Sioux Falls. C'est une connaissance de Bobby Singer et elle apparaît pour la première fois dans l'épisode 15 de la saison 5 Dead Men Don't Wear Plaiddans lequel les morts de la ville ressuscitent puis se transforment en zombies. Son fils, Owen, est l'un des premiers morts à revenir à la vie, c'est pour cette raison qu'elle fait tout pour empêcher Sam et Dean d'enquêter sur l'affaire. Finalement, Owen, devenu un zombie, dévore son mari et sera tué par Sam. Après cela, elle aide les Winchester à tuer les zombies restants en ville. 

Charlie (Felicia Day):

Charlie Bradbury est une geek experte en informatique travaillant pour Richard Roman Enterprises. Elle aide les frères à arrêter Dick Roman, mais s’en va après. Elle fait des apparitions étonnantes dans les saisons 8 et 9, aidant les frères dans différentes chasses.

Garth (DJ Qualls):

Garth est un chasseur envoyé par Bobby pour venir en aide à Dean. On le voit ensuite dans quelques autres épisodes enquêter avec les frères Winchester. Garth a un côté gaffeur et très maladroit, ce qui étonne Sam et Dean, qui se demandent comment il arrive à rester en vie avec la profession qu'il exerce.

Saison 1:

La première saison nous plonge dans l'univers surnaturel des frères Winchester, qui refont équipe après plusieurs années. Après la mort de leur mère, Leur père devient chasseur pour retrouver le démon qui l'a tuée et venger sa mort. Il entraîne avec lui ses deux fils,qui seront élevés comme des soldats et grandiront dans cet univers. Vingt-deux ans après la mort de leur mère ; John disparaît et Dean décide d'aller retrouver Sam qui se trouve à l'université pour l'aider à le rechercher. Tout au long de la saison, ils sont à sa recherche en combattant des esprits, des polymorphes et d'autres monstres.L'histoire présentent chaque épisode comme un nouveau film d'horreur.

Saison 2:

La deuxième saison est principalement centrée autour de Sam, les pouvoirs démoniaques qu'il développe et les plans que le démon aux yeux jaunes a prévu pour lui. Elle montre également les difficultés de Dean à accepter que son père se soit sacrifié pour le sauver après avoir été percuté de plein fouet par un semi-remorque et met en avant une future guerre contre les démons et les forces démoniaques.

Saison 3:

Pendant la troisième saison, les deux frères cherchent désespérément un moyen de libérer Dean du pacte qu'il a passé avec un démon. Ce pacte, fait dans le but de ramener Sam à la vie, ne lui laisse qu'un an à vivre avant qu'il ne soit envoyé en Enfer. La guerre contre les démons échappés de l'enfer est ouverte et le nouveau chef du nom de Lilith fait son apparition.

Saison 4:

Dans la quatrième saison, Dean, ramené parmi les vivants, a pour mission d'empêcher l'Apocalypse de se produire. Il est aidé par Sam mais les relations entre les Winchester deviennent tendues quand Dean découvre que son frère lui ment et continue d'utiliser ses pouvoirs démoniaques en buvant du sang de démon.

Saison 5:

Durant la cinquième saison, les deux frères doivent maintenant arrêter l'Apocalypse. Cependant, ils ne s'entendent plus du fait que Dean n'arrive pas à pardonner à Sam sa trahison. Malgré tout, au fur et à mesure de la saison, les deux frères réapprennent à faire équipe et Dean retrouve petit à petit la confiance qu'il avait perdu en Sam. Néanmoins, ils sont poursuivis par des anges et des démons. Sam doit accepter la proposition de Lucifer. Ce serait le seul moyen de stopper l'Apocalypse. Mais les deux frères relèvent le défi de l'arrêter seuls, avec l'aide de Castiel, mais qui voit ses pouvoirs s'amenuiser au fur et à mesure de la saison du fait qu'il ait été déchu…

Saison 6:

Lors de la sixième saison, les deux frères font équipe à nouveau, mais l'attitude de Sam dérange Dean qui va jusqu'à douter de son propre frère. De plus, d'importantes créatures surnaturelles ont des comportements bizarres et l'origine des premières créatures de chaque espèce est dévoilée. Des créatures censées être disparues ou jamais rencontrées jusque-là font également surface. Ils semblent tous vouloir ouvrir la porte du purgatoire afin de libérer une créature. Pendant ce temps, Castiel est en guerre contre Raphaël au Paradis.

Saison 7:

Lors de la septième saison, Castiel a absorbé des âmes de créatures encore plus vieilles que les hommes et les anges, les Léviathans. Pendant quelque temps, il devient le « Nouveau Dieu », avant de se rendre compte de son erreur, et décide de renvoyer toutes les âmes au Purgatoire. Les Léviathans résistent et réussissent à sortir de Castiel. Dean, Sam et Bobby s'apprêtent alors à sauver une nouvelle fois le monde entier en essayant de les arrêter. À leurs risques et périls…

Saison 8:

Lors de la huitième saison, Dean et Castiel se retrouvent au Purgatoire, tandis que Sam reste seul sur Terre. Dean réussit à sortir du Purgatoire puis il retrouve Sam qui avait arrêté la chasse. Pendant ce temps, Kevin Tran réussi à s'échapper de l'emprise de Crowley puis Dean et Sam le retrouvent plus tard. Kévin leur apprend qu'il existe une autre tablette de Dieu qui indique comment fermer les portes de l'Enfer à jamais. Dean, Sam et Kevin vont tout faire pour réussir à fermer les portes de l'Enfer.

Saison 9:

Lors de la neuvième saison Dean, Sam, Castiel et Kevin doivent désormais échapper aux anges et se sont lancés à leurs poursuite pour se venger. La plupart des démons ont été recrutés par Abbadon qui s'est fixé comme objectif de s'emparer de l'Enfer en détrônant Crowley. Dean, Sam, Castiel et Kevin vont une nouvelle fois dépasser leurs limites afin de maîtriser les anges en colère et restaurer l'ordre sur Terre.